( 兔抗流感嗜血桿菌診斷血清試劑 ( a、b、c、d、e、f 型 ) 2mL*6 種 / 盒 )
一、檢測方法
1. 本產(chǎn)品在使用前，由冰箱拿出，平衡到室溫后使用。
2. 樣品分離培養(yǎng)物，經(jīng)鑒定確定為流感嗜血桿菌后，再進行血清分型檢測，如果未能確定為流感嗜血桿菌，不宜直接進行血清凝集檢測，以免產(chǎn)生假陽性結(jié)果。
3. 待鑒定細菌在血平板或巧克力平板上，37℃，5% CO2，培養(yǎng) 18-24 小時。
4. 用酒精擦拭載玻片。用蠟筆或防水筆在載玻片上劃格分區(qū)。
5. 在玻片每格的下半部分，用移液器滴加 5%的福爾馬林溶液 10μL（基于生物安全目的），用無菌或一次性 10μL 接種環(huán)挑取 BAP 平板上過夜培養(yǎng)的新鮮菌落，在玻片上將細菌與 5%的福爾馬林溶液混勻，混勻后的液體應(yīng)該不透明，在加抗血清前應(yīng)保持細菌懸液不干燥。
6. 在玻片的上方加 10μL 血清群型特異的抗血清，同時在陰性對照側(cè)加 PBS 或者生理鹽水。
7. 也可滴加 20μL 抗血清在玻片上，挑取新鮮菌落直接與抗血清進行混勻，觀察凝集反應(yīng)。（如采用非滅活菌進行凝集，操作嚴格遵守生物安全操作規(guī)范，在 BSL-2 級生物安全柜內(nèi)進行操作）。
8. 緩慢的混合細菌懸液和抗血清，使上部的抗血清和下部的細菌懸液充分混合 5 分鐘。不要做旋轉(zhuǎn)晃動，以免不同血清型的血清會相互混合污染。
9. 在燈光下，黑暗背景條件下觀察結(jié)果。5 分鐘內(nèi)呈 2+及以上凝集現(xiàn)象為陽性，5 分鐘內(nèi)呈現(xiàn) 2+以下凝集現(xiàn)象為陰性。如果過了 5 分鐘，才發(fā)生的凝集反應(yīng)按陰性處理。
二、檢驗結(jié)果的解釋
當抗血清與細菌接觸，會引起凝集反應(yīng)，使細胞（細菌）凝集或呈簇，細胞（細菌）上清液變得清亮，細胞懸液濃度或使用的抗血清濃度不同，會產(chǎn)生不同的強度的凝集反應(yīng)，見圖示
＋＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋ ＋ ± －
4+ 所有的細胞都發(fā)生凝集，細胞懸液清亮。
3+ 75%的細胞發(fā)生凝集，細胞上清略微渾濁不清。
2+ 50%的細胞發(fā)生凝集，細胞上清略微渾濁不清。
1+ 25%的細胞發(fā)生凝集，細胞上清略微渾濁不清。
+/- 少于 25%的細胞發(fā)生凝集，可見有顆粒狀的成分。
0 沒有肉眼可見的凝集，上清懸液渾濁、平滑。
【血清群確定】
1. 5 分鐘內(nèi)，出現(xiàn) 3+或 4+凝集為陽性反應(yīng)（強陽性反應(yīng)）。
2. 陰性反應(yīng)是+/-、1+凝集程度。
3. 當菌株僅與一種抗血清出現(xiàn)凝集，但和生理鹽水不凝集時才能鑒定為該種血清型。
4. 當一個菌株可以同時和一個以上抗血清反應(yīng)時，結(jié)果記為不可分型流感嗜血桿菌（NG）。
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