（ 兔抗腦膜炎球菌診斷血清試劑(A、B、C、W、X、Y、E、Z、L、H、I、K、多價Ⅰ、多價Ⅱ，多價Ⅲ、多價Ⅳ群) 2mL*16種 / 盒 ）
一、檢測方法
1. 本產(chǎn)品在使用前，由冰箱拿出，平衡到室溫后使用。
2. 樣品分離培養(yǎng)物，經(jīng)鑒定確定為腦膜炎奈瑟菌后，再進行血清分群檢測，如果未能確定為腦膜炎奈瑟菌，不宜直接進行血清凝集檢測，以免產(chǎn)生假陽性結(jié)果。
3. 待鑒定細菌在血平板或巧克力平板上，37℃，5% CO2，培養(yǎng) 18-24 小時。
4. 用酒精擦拭載玻片。用蠟筆或防水筆在載玻片上劃格分區(qū)。
5. 在玻片每格的下半部分，用移液器滴加 5%的福爾馬林溶液 10μL（基于生物安全目的），用無菌或一次性 10μL 接種環(huán)挑取 BAP 平板上過夜培養(yǎng)的新鮮菌落，在玻片上將細菌與 5%的福爾馬林溶液混勻，混勻后的液體應該不透明，在加抗血清前應保持細菌懸液不干燥。
6. 在玻片的上方加 10μL 血清群特異的抗血清，同時在陰性對照側(cè)加 PBS 或者生理鹽水。
7. 也可滴加 20μL 抗血清在玻片上，挑取新鮮菌落直接與抗血清進行混勻，觀察凝集反應。（如采用非滅活菌進行凝集，操作嚴格遵守生物安全操作規(guī)范，在 BSL-2 級生物安全柜內(nèi)進行操作）。
8. 緩慢的混合細菌懸液和抗血清，使上部的抗血清和下部的細菌懸液充分混合 5 分鐘。不要做旋轉(zhuǎn)晃動，以免不同血清群的血清會相互混合污染。
9. 在燈光下，黑暗背景條件下 5 分鐘內(nèi)觀察結(jié)果。如果超過 5 分鐘，才發(fā)生的凝集反應按陰性處理。
10. 建議待檢細菌先分別與多價 I、多價 II、多價Ⅲ和多價Ⅳ抗血清進行凝集反應，如與多價 I 出現(xiàn)凝集反應陽性，再分別再與 A、B、C 三個群特異抗血清進行凝集反應；如與多價 II 出現(xiàn)凝集反應陽性，再分別再與 W、X、Y 三個群特異抗血清進行凝集反應；如與多價Ⅲ出現(xiàn)凝集反應陽性，再分別再與 E、Z、L 三個群特異抗血清進行凝集反應；如與多價Ⅳ出現(xiàn)凝集反應陽性，再分別再與H、I、K 三個群特異抗血清進行凝集反應。
二、檢驗結(jié)果的解釋
當抗血清與細菌接觸，會引起凝集反應，使細胞（細菌）凝集或呈簇，細胞（細菌）上清液變得清亮，細胞懸液濃度或使用的抗血清濃度不同，會產(chǎn)生不同的強度的凝集反應，見圖示
＋＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋ ＋ ± －
4+ 所有的細胞都發(fā)生凝集，細胞懸液清亮。
3+ 75%的細胞發(fā)生凝集，細胞上清略微渾濁不清。
2+ 50%的細胞發(fā)生凝集，細胞上清略微渾濁不清。
1+ 25%的細胞發(fā)生凝集，細胞上清略微渾濁不清。
+/- 少于 25%的細胞發(fā)生凝集，可見有顆粒狀的成分。
0 沒有肉眼可見的凝集，上清懸液渾濁、平滑。
【血清群確定】
1. 5 分鐘內(nèi)，出現(xiàn) 3+或 4+凝集為陽性反應（強陽性反應）。對于 B 群腦膜炎奈瑟菌來說，如果出現(xiàn)2+及以上的凝集則可認為陽性。
2. 陰性反應是+/-、1+凝集程度。
3. 當菌株僅與一種抗血清出現(xiàn)凝集，但和生理鹽水不凝集時才能鑒定為該種血清群。
4. 如果不能確定血清群，菌株記為不可分群腦膜炎奈瑟菌（NG）。
5. 關(guān)于不可分群腦膜炎奈瑟菌（NG）菌株:
1) 在生理鹽水中凝集，無論與任何一種抗血清發(fā)生強凝集，記為 NG。
2) 在生理鹽水中不凝集，但和多種抗血清發(fā)生凝集，記為 NG。
3) 在生理鹽水中不凝集，也不和任何一種抗血清發(fā)生凝集，記為 NG。
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