百日咳（pertussis,whooping cough）是由百日咳鮑特菌（Bordetella pertussis）感染引起的急性呼吸道傳染病，是《中華人民共和國(guó)傳染病防治法》規(guī)定的乙類傳染病。中華人民共和國(guó)國(guó)家衛(wèi)生健康委員會(huì)發(fā)布的《百日咳防控方案（2024年版）》總體要求開(kāi)展多渠道監(jiān)測(cè)預(yù)警，加強(qiáng)疫情分析與風(fēng)險(xiǎn)研判，及時(shí)發(fā)現(xiàn)、規(guī)范治療病例，有效處置聚集性疫情，堅(jiān)決遏制百日咳疫情擴(kuò)散蔓延勢(shì)頭，最大限度降低重癥、死亡風(fēng)險(xiǎn)。
百日咳鮑特菌最適生長(zhǎng)的溫度為35～37℃，對(duì)生長(zhǎng)營(yíng)養(yǎng)條件需求較高，體外較難培養(yǎng)，對(duì)外界理化因素抵抗力較弱，在體外存活時(shí)間短。因此，針對(duì)百日咳鮑特菌的采樣和培養(yǎng)研發(fā)了百日咳鮑特菌增菌培養(yǎng)檢測(cè)試劑。其使用指南如下：
①樣本采集
根據(jù)采樣要求，使用鼻/咽拭子采集樣本；將采樣拭子放到百日咳鮑特菌樣本采集液中，折斷采樣拭子桿高出部分或按斷點(diǎn)折斷拭子，擰緊蓋子，標(biāo)記樣本信息，冷藏送至實(shí)驗(yàn)室處理。
若標(biāo)本預(yù)計(jì)48h內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)，可于2~8℃冷藏保存；若標(biāo)本計(jì)劃1個(gè)月內(nèi)完成檢測(cè)，可于-20℃低溫凍存；若標(biāo)本需長(zhǎng)期保存，可-70℃以下超低溫凍存。低溫保存期間標(biāo)本不可凍融。
②樣本處理：
將樣本采集液中的鼻/咽拭子充分?jǐn)D壓50~80次或者渦旋震蕩30s，讓標(biāo)本中的細(xì)菌均勻分布于采集液。凍存標(biāo)本需解凍溶化后按上述方法混勻使用。處理后的標(biāo)本可進(jìn)行PCR鑒定，也可以接種于選擇培養(yǎng)基或增菌培養(yǎng)基進(jìn)行分離培養(yǎng)。
③樣本增菌：
1）增菌液配制：百日咳鮑特菌增菌液須現(xiàn)用現(xiàn)配，實(shí)驗(yàn)前取所需數(shù)量的基礎(chǔ)增菌液、添加劑A、添加劑B，無(wú)菌操作放入生物安全柜，溶化后將添加劑A、B顛倒混勻瞬時(shí)離心，分別取添加劑A 20μL、添加劑B 200μL加入到1.8 mL的基礎(chǔ)增菌液中混勻備用。
注：①實(shí)驗(yàn)過(guò)程嚴(yán)格執(zhí)行無(wú)菌操作；②百日咳鮑特菌增菌液需要現(xiàn)用現(xiàn)配；③添加劑反復(fù)凍融會(huì)降低分離培養(yǎng)效果，建議第一次使用后適當(dāng)分裝凍存。
2）增菌培養(yǎng)：取200μL混勻后的采集液，加入到2 mL現(xiàn)配的百日咳鮑特菌增菌液中，36±1?C靜置培養(yǎng)48 h～72 h。
④平板培養(yǎng)：
平板培養(yǎng)：增菌后充分混勻培養(yǎng)液，取50-100μL的增菌液劃線或者直接涂抹于木炭選擇性瓊脂平板上，37±1?C培養(yǎng)3～7天，挑取疑似菌落進(jìn)行鏡檢、生化試驗(yàn)、熒光PCR或者質(zhì)譜等方法鑒定。
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