布魯氏菌熒光偏振儀簡介
主要應(yīng)用:
用于實驗室和采樣現(xiàn)場人抗布魯氏菌抗體檢測分析。
適用樣本:
血清及其它樣品如全血、血漿、腦脊液、淋巴液、奶液等。
熒光偏振是一種特殊的熒光檢測技術(shù),該技術(shù)早在1926 年就由Perrin 第一次說明了。這項技術(shù)主要基于熒光基團在被偏振光激發(fā)后會發(fā)出偏振光的原理。在溶液中,發(fā)出的偏振光的強度與熒光分子的轉(zhuǎn)動速度成反比,而熒光分子的轉(zhuǎn)動速度受到反應(yīng)溶液的粘稠度,絕對溫度,分子大小和氣體常數(shù)影響。如果保持液體粘性和溫度恒定,那么分子的轉(zhuǎn)動速度就只與分子大小或者分子重量相關(guān)。
熒光偏振檢測采用水平和垂直兩個偏振濾光片來把激發(fā)光源變成偏振光。熒光分子的偏振值與分子的轉(zhuǎn)動速度成反比。由于分子轉(zhuǎn)動速度同時與分子大小成反比,在分子復(fù)合物變大時熒光偏振值也變大,在分子復(fù)合物變小時熒光偏振值也變小。發(fā)射的熒光強度通過水平偏振片和垂直偏振片后進行檢測。水平偏振光轉(zhuǎn)變?yōu)榇怪逼窆獾某潭扰c熒光分子的轉(zhuǎn)動速度成正比。如果一個熒光分子比較大,在激發(fā)過程中分子的移動非常慢,這樣水平偏振光轉(zhuǎn)變?yōu)榇怪逼窆獾膹姸染秃苄?。然而,如果熒光分子很小,轉(zhuǎn)動速度非??欤蜁?dǎo)致較大的水平偏振光轉(zhuǎn)變?yōu)榇怪逼窆狻?/span>
實驗原理:
使用O-多聚糖(OPS)偶聯(lián)一個熒光素來檢測布魯氏菌特異性的抗體。脂多糖是細菌細胞壁的主要組成部分,也是宿主抗體的抗原決定簇。OPS-熒光素分子相對比較小,可以在溶液中自由移動。這樣分子的熒光偏振值就比較小。如果溶液中含有OPS特異性抗體,那么抗體就會和OPS結(jié)合使分子復(fù)合物變大,這樣會導(dǎo)致熒光偏振值增大。
牛分枝桿菌特異性抗原也采用類似的方式檢測。檢測牛分枝桿菌采用熒光標記一個與細菌MPB70 蛋白表位類似的多肽。當這個表位特異性的抗體與熒光標記多肽結(jié)合時,熒光偏振性就增強。
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