Perin于1926年首先描述了熒光偏振理論,他觀察到溶液中的熒光分子在受到偏振光激發(fā)時,如果在激發(fā)時分子保持靜止,該分子將發(fā)出固定偏振平面的發(fā)射光(發(fā)射光仍保持偏振性)。然而,如果分子旋轉(zhuǎn)或翻轉(zhuǎn)那么發(fā)射光的偏振平面將不同于初始激發(fā)光的偏振平面。分子的偏振性與分子旋轉(zhuǎn)關(guān)時間成比例,分子旋轉(zhuǎn)馳豫時間是分子轉(zhuǎn)過 68.5度角時所用的時間。分子旋轉(zhuǎn)馳豫時間與粘度、絕對濕度,分子體積和氣體常數(shù)有關(guān)。
光由微小的波構(gòu)成,光波可以在任何一個平面上均勻的振動。當(dāng)其通過某些平面時,有可能因受到平面的作用將光波的能量分成不均勻的光束,振動平面也就發(fā)生了變化,可能在個方向的振動強或弱于其他平面,這種光稱為偏振光?；瘜W(xué)研究中常用到偏氪光理論,這是因為偏振光在通過含有某種分子的溶液時,其損動性質(zhì)將發(fā)生改變,如偏振平面受到扭轉(zhuǎn),根據(jù)轉(zhuǎn)的方的和角度的變化,獻(xiàn)能夠?qū)θ芤褐蟹至说慕Y(jié)構(gòu)作出推斷。
熒光偏振分析是利用熒光偏振的原理,通過檢測熒光素標(biāo)記的小分子與其它分子相互作用前后分子量的變化,計算水平方向及垂直方向的熒光偏振值作相關(guān)分析。如果被檢測分子大,激發(fā)時運動慢,測得的熒光偏振光值高。如果分子小,分子旋轉(zhuǎn)或翻轉(zhuǎn)速度快,發(fā)射光相對于激發(fā)光平面將去偏振化,測得的偏振光值低,從而計算出樣品的偏振值(偏振伯單位MP)。通過專用分析軟件,可對給則結(jié)果進(jìn)行分析,判別等工作。
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