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軍團(tuán)菌（Legionella）是一類革蘭氏陰性桿菌，廣泛存在于自然水體中，尤其在溫暖、潮濕的環(huán)境中繁殖迅速。它們喜歡藏身于空調(diào)系統(tǒng)、冷卻塔、熱水器等人工水系統(tǒng)中，通過氣溶膠傳播進(jìn)入人體肺部，引發(fā)感染，“軍團(tuán)病”就是一種由軍團(tuán)菌引起的嚴(yán)重肺炎，在免疫力低下的人群中具有較高的致死率。雖然軍團(tuán)菌在自然界中無處不在，但要成功分離和培養(yǎng)它們卻并非易事。軍團(tuán)菌對營養(yǎng)要求苛刻，且生長緩慢，因此需要特殊的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件。

1、標(biāo)本采集

軍團(tuán)菌的臨床標(biāo)本包括痰、支氣管肺泡灌洗液、胸腔穿刺液、胸水等。標(biāo)本采集后應(yīng)立即接種，不能接種的標(biāo)本放于4℃冰箱保存，最好于24h內(nèi)進(jìn)行接種，為抑制其他細(xì)菌生長，應(yīng)當(dāng)采用選擇性培養(yǎng)基。

2、分離培養(yǎng)

軍團(tuán)菌在常規(guī)的呼吸道病原菌初代分離培養(yǎng)基上不能夠生長，在BCYE培養(yǎng)基上生長。但是，某些種的軍團(tuán)菌在BCYE培養(yǎng)基上生長微弱。軍團(tuán)菌最適宜的生長條件是35～37℃，2.5%～5%CO2。軍團(tuán)菌初代培養(yǎng)需要鐵離子和半胱氨酸，因此，在不含 L-半胱氨酸的BCYE培養(yǎng)基（BCYE-cys）上不能夠生長。為了減少雜菌的干擾，初代培養(yǎng)時需要使用選擇性的培養(yǎng)基（如：MWY、GVPC）以抑制雜菌生長。

操作如下：

（1）將新鮮采集的標(biāo)本（痰、支氣管肺泡灌洗液、胸腔穿刺液、胸水等）取100μL劃線接種到GVPC、MWY瓊脂上，35～37℃，2.5%～5%CO2培養(yǎng)；

（2）每天觀察細(xì)菌生長情況，最少孵育15d時間。

注：在培養(yǎng)箱內(nèi)放置一個盛水托盤，以保證培養(yǎng)箱內(nèi)空氣的濕度；CO2環(huán)境有利于軍團(tuán)菌生長。