軍團菌初篩包括平板生長試驗、革蘭染色鏡檢,生化試驗。
(1)平板生長試驗
將可疑菌株接種到BCYE和BCYE-CYS(或血平板)兩種培養(yǎng)基上。觀察菌株生長情況。(軍團菌不在BCYE-CYS或血平板上生長)。在BCYE培養(yǎng)基上生長,可能為軍團菌。而在BCYE-CYS(或血平板)兩種培養(yǎng)基均生長者不是軍團菌。
(2)革蘭染色鏡檢
軍團菌是革蘭染色陰性,淺紅色的短桿菌,直徑0.3μm~0.5μm,長約1.2μm~5μm或更長,菌體一端有鞭毛,長時間培養(yǎng)后鞭毛可能變成長絲狀。
(3)生化試驗
①觸酶試驗
挑取一環(huán)(10μL)BCYE瓊脂上對數生長期的細菌,于潔凈玻片上,加1滴新鮮配制的3%的過氧化氫溶液覆蓋細菌。如果30s內冒出氣泡,則表示此細菌含有觸酶,屬于陽性反應。超過30s為陰性。
②馬尿酸水解試驗
將待鑒定菌株,于1%馬尿酸鈉溶液中,制成2.0麥氏濃度(108CFU/mL)菌懸液,于36℃±1℃,2.5%~5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)2h后,沿管壁加入3.5%水合印三酮試劑,觀察顏色變化。如果15min內,溶液出現藍紫色至深紫色變化,為陽性反應。溶液無顏色變化或15min后出現顏色變化為陰性。
軍團菌生化特性相對來說不明顯,一般觸酶(+),水解馬尿酸(+)。
綜上所述,在BCYE培養(yǎng)基上生長,而在BCYE-CYS(或血平板)上不生長者,如果鏡下形態(tài)為淺紅色的短桿狀或絲狀,觸酶(+),水解馬尿酸(+),可考慮該菌為高度可疑軍團菌。
軍團菌的生化特性相對不明顯,生化試驗鑒定結果僅作參考。除了上述傳統(tǒng)方法,也可以通過微生物質譜、特異基因PCR檢測、16sRNA基因測序的方法進行鑒定。







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