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肺炎支原體（M.Pneumonia）是人類支原體肺炎的病原體，大小約200nm，介于細(xì)菌和病毒之間，無(wú)細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)，菌落可呈“煎荷包蛋”形狀，對(duì)熱和干燥較敏感，56℃即滅活，4℃僅存活1d，在凍干情況下能長(zhǎng)期保存。目前，國(guó)內(nèi)外支原體的檢測(cè)主要依靠實(shí)驗(yàn)室診斷手段，一般包括病原菌的培養(yǎng)、血清學(xué)、間接免疫熒光法以及分子生物學(xué)等檢測(cè)技術(shù)。在大多數(shù)情況下，基于分子生物學(xué)的方法比間接檢測(cè)方法（如血清學(xué)方法）具有更高的分析和臨床診斷靈敏度，大多數(shù)核酸分子診斷技術(shù)檢測(cè)方法可以檢測(cè)到 100 CFU/mL 的 MP。

核酸變溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)技術(shù)是常用的分子檢測(cè)技術(shù)，包括：

1、實(shí)時(shí) PCR ：與傳統(tǒng) PCR 反應(yīng)相比，實(shí)時(shí) PCR 反應(yīng)具有靈敏度高、檢測(cè)效率高，既能定性也可以定量反應(yīng)。

2、廣泛 PCR ：廣泛 PCR 是 PCR 技術(shù)的一個(gè)重要改進(jìn)，針對(duì)某一類或某一大類的微生物設(shè)計(jì)的通用型 PCR 技術(shù)。

3、巢式 PCR ：與普通 PCR 的不同之處在于擴(kuò)增過程中設(shè)計(jì)的兩個(gè)反應(yīng)，每個(gè)反應(yīng)需使用不同的擴(kuò)增引物。第一對(duì)擴(kuò)增引物片段和普通 PCR 相似，第二對(duì)引物稱為巢式引物，位于第一對(duì)引物內(nèi)側(cè)，并以第一次擴(kuò)增反應(yīng)的產(chǎn)物為模板。巢式 PCR 的優(yōu)點(diǎn)是 ：（1）先后使用兩對(duì)引物可使循環(huán)數(shù)倍增，從而提高了 PCR 的靈敏度和所需 PCR 產(chǎn)物的產(chǎn)量；（2）反應(yīng)特異性很高。如果第一次擴(kuò)增產(chǎn)生了錯(cuò)誤片段，則第二次能在錯(cuò)誤片段上進(jìn)行引物配對(duì)并擴(kuò)增的概率極低，從而降低非特異性擴(kuò)增反應(yīng)的發(fā)生。

4、多重 PCR ：多重 PCR 也稱復(fù)合 PCR，其原理與常規(guī) PCR 相同，高溫變性、低溫退火、適溫延伸，二者區(qū)別在于多重 PCR 是在同一 PCR 反應(yīng)體系里加上 2 對(duì)以上引物，同時(shí)擴(kuò)增出多個(gè)核酸片段。多重PCR 既有單個(gè) PCR 的特異性和靈敏度，又相對(duì)快捷和經(jīng)濟(jì)，被廣泛地應(yīng)用于包括核酸診斷在內(nèi)的諸多領(lǐng)域。