(四)硫化氫(H2S)產(chǎn)生試驗(yàn)
1. 原理:
不同種型布魯氏菌在新陳代謝過(guò)程中所需要的各種氨基酸有所不同,有些種型布魯氏菌可將培養(yǎng)基中含硫的氨基酸分解,產(chǎn)生硫化氫、氨和脂肪酸等,硫化氫可與醋酸鉛發(fā)生反應(yīng)形成黑色的含鉛硫化物,據(jù)此可以區(qū)別某些種型的布魯氏菌。
2. 試驗(yàn)材料、試劑制備:
(1) 布氏瓊脂斜面培養(yǎng)基配制
布氏瓊脂培養(yǎng)基:43g
蒸餾水:1000m1
煮沸混勻,分裝玻璃試管,高壓滅菌后斜放凝固制成布氏瓊脂斜面培養(yǎng)基保存?zhèn)溆谩?/span>
(2) 醋酸鉛濾紙條制備:
將普通濾紙剪成長(zhǎng)7~8cm長(zhǎng),0.8~1cm寬小條,經(jīng)滅菌后浸泡在 10%醋酸鉛水溶液中 24小時(shí),取出放滅菌的方盤(pán)中,溫箱烤干。
(3) 操作方法:
將待檢菌 48 小時(shí)培養(yǎng)物用滅菌生理鹽水制成 10 億菌體 /ml的菌懸液,用直徑2mm的接種環(huán)勾取一環(huán)菌懸液(或10μL菌懸液)接種在pH6.8的瓊脂斜面上,將醋酸鉛濾紙條夾于斜面與管壁之間,使濾紙條和斜面保持平行,以不接觸斜面為宜。濾紙條留在管外約1~2cm,置 37℃溫箱培養(yǎng),經(jīng)2、4 、6天各觀察一次結(jié)果,以毫米計(jì)算濾紙條變黑長(zhǎng)度。每觀察一次更換-個(gè)濾紙條,3 次變黑長(zhǎng)度總和為最后結(jié)果,不變黑為陰性。
(4) 結(jié)果判定:
豬種1型布魯氏菌產(chǎn)生H2S量最多,持續(xù)時(shí)間可達(dá)10天濾紙條變黑部分可達(dá)19~20mm以上。
牛種布魯氏菌1~4和9型布魯氏菌、沙林鼠種布魯氏菌均能產(chǎn)生中等量的H2S,濾紙條變黑部分5~8mm。
牛種布魯氏菌6和7型的某些菌株也能產(chǎn)生少量的H2S,其余種型布魯氏菌不產(chǎn)生H2S。
但我國(guó)某些地方分離的豬種3型布魯氏菌和羊種1型布魯氏菌可產(chǎn)生微量H2S,使濾紙條下端呈現(xiàn)黑褐色的一個(gè)小邊,類(lèi)似灰線條樣,有的濾紙條變黑在 0.5~1mm 之間。







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