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1、 預(yù)增菌 

無菌操作取25g(mL)樣品,置于盛有225mLBPW 的無菌均質(zhì)杯中,以8000r/min～10000r/min 均質(zhì)1min～2min,或置于盛有225mLBPW 的無菌均質(zhì)袋內(nèi),用拍擊式均質(zhì)器拍打1min～2min。 

對于液態(tài)樣品,也可置于盛有225mLBPW 的無菌錐形瓶或其他合適容器中振蕩混勻。如需調(diào)節(jié) pH 時,用1mol/LNaOH 或 HCl調(diào)pH 至6.8±0.2。

無菌操作將樣品轉(zhuǎn)至500mL錐形瓶或其他合適容器內(nèi)(如均質(zhì)杯本身具有無孔蓋或使用均質(zhì)袋時,可不轉(zhuǎn)移樣品),置于36 ℃±1 ℃培養(yǎng)8h～18h。

對于乳粉,無菌操作稱取25g樣品,緩緩傾倒在廣口瓶或均質(zhì)袋內(nèi)225mLBPW 的液體表面,勿調(diào)節(jié)pH,也暫不混勻,室溫靜置60min±5min后再混勻,置于36 ℃±1 ℃培養(yǎng)16h～18h。 

冷凍樣品如需解凍,取樣前在40 ℃～45℃的水浴中解凍不超過15min,或在2℃～8℃冰箱緩慢化凍不超過18h。 

2、 選擇性增菌 

輕輕搖動預(yù)增菌的培養(yǎng)物,移取0.1mL轉(zhuǎn)種于10mLRVS 中,混勻后于42 ℃±1 ℃培養(yǎng)18h～24h。

同時,另取1mL轉(zhuǎn)種于10mLTTB 中后混勻,低背景菌的樣品(如深加工的預(yù)包裝食品等)置于36 ℃±1 ℃培養(yǎng)18h～24h,高背景菌的樣品(如生鮮禽肉等)置于42 ℃±1 ℃培養(yǎng)18h～24h。 如有需要,可將預(yù)增菌的培養(yǎng)物在2 ℃～8 ℃冰箱保存不超過72h,再進(jìn)行選擇性增菌。 

3、 分離 

振蕩混勻選擇性增菌的培養(yǎng)物后,用直徑3mm 的接種環(huán)取每種選擇性增菌的培養(yǎng)物各一環(huán),分別劃線接種于一個 BS瓊脂平板和一個 XLD 瓊脂平板(也可使用 HE 瓊脂平板、沙門氏菌顯色培養(yǎng)基平板或其他合適的分離瓊脂平板),于36℃±1℃分別培養(yǎng)40h～48h(BS瓊脂平板)或18h～24h(XLD 瓊脂平板、HE瓊脂平板、沙門氏菌顯色培養(yǎng)基平板),觀察各個平板上生長的菌落的菌落特征。

如有需要,可將選擇性增菌的培養(yǎng)物在2 ℃～8 ℃冰箱保存不超過72h,再進(jìn)行分離。