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1、增菌

以無菌操作取 25 g(mL)樣品,置于盛有 225 ml, FB1增菌肉湯的無菌均質(zhì)杯內(nèi),8000 r/min～10000 r/min 均質(zhì) 1 min～2 min,或放入含有 225 mLFB1增菌肉湯的無菌均質(zhì)袋中,用拍擊式均質(zhì)器拍打1 min～2 min,制成1:10 的樣品勻液。若樣品為液態(tài),也可采用振蕩或攪拌混勻。于 30 ℃±1℃培養(yǎng) 24 h±2 h。混勻,吸取 0.1 ml, FB1增菌肉湯,轉(zhuǎn)種于10 ml FB2增菌肉湯內(nèi)。于30 ℃±1 ℃培養(yǎng)24 h士2 h。

2、分離

取混勻后的 FB2增菌肉湯,分別接種于OA李斯特氏菌顯色培養(yǎng)基(或其他等效李斯特氏菌顯色培養(yǎng)基)平板和 PALCAM 培養(yǎng)基平板,36 ℃士1℃培養(yǎng)24 h～48 h,觀察各個平板上生長的菌落。

典型菌落在 OA李斯特氏菌顯色培養(yǎng)基平板上形成直徑為1mm～3 mm 的圓形藍(lán)綠色菌落,周圍有不透明的暈圈。

典型菌落在 PALCAM 培養(yǎng)基平板上形成直徑為1mm～3 mm 的圓形灰綠色菌落,周圍有棕黑色水解圈,培養(yǎng) 48h后,部分菌落中心形成黑點(diǎn)且有凹陷。

其他等效李斯特氏菌顯色培養(yǎng)基平板上的菌落特征參照產(chǎn)品說明進(jìn)行判定。

注1:一些單核細(xì)胞增生李斯特氏菌在 OA李斯特氏菌顯色培養(yǎng)基上的菌落周圍的暈圈不明顯甚至沒有暈圈。還有一些單核細(xì)胞增生李斯特氏菌在 OA李斯特氏菌顯色培養(yǎng)基上的菌落周圍的暈圈出現(xiàn)得比較遲緩,有時需要 4d 以上才出現(xiàn)。

注2:伊氏李斯特氏菌在OA李斯特氏菌顯色培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)與單核細(xì)胞增生李斯特氏菌相似。

3、純培養(yǎng)

從每個平板(符合2要求的平板)中挑取3個～5 個典型或可疑菌落(少于3個全選),在 TSA-YE平板或羊血平板上劃線,于 36 ℃士1℃培養(yǎng)18 h～24 h。單核細(xì)胞增生李斯特氏菌在 TSA-YE平板或羊血平板上,呈灰白色,半透明,邊緣整齊,露滴狀菌落、直徑為1 mm～2 mm。