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微生物學(xué)中將在實(shí)驗(yàn)條件下從一個(gè)單細(xì)胞或一種細(xì)胞群繁殖得到的后代稱為純培養(yǎng)(purecultivation)。獲得微生物純培養(yǎng)是利用和研究微生物的基礎(chǔ)，常用的分離獲得微生物純培養(yǎng)的方法有以下幾種。

1、稀釋平皿法

首先將待測樣品用無菌水制成一系列的稀釋梯度，如10^-1、10^-2、10^-3、10^-…取最后3個(gè)稀釋度、通常細(xì)菌取10^-4～10^-6，放線菌取10^-3～10^-5、霉菌取10^-2～10^-4。以傾注平皿法或涂布平板法接種于合適的培養(yǎng)基，每個(gè)稀釋度做3～5個(gè)平行。將接種后的平板培養(yǎng)一段時(shí)間后即可有菌落出現(xiàn)，取稀釋得當(dāng)?shù)钠桨?，也就是在平板上出現(xiàn)單個(gè)的分散的菌落，這個(gè)菌落可能就是由一個(gè)微生物細(xì)胞繁殖形成的，挑取該單菌落，即可得到純培養(yǎng)。

2、劃線法

將樣品用無菌水制成較高濃度的菌懸液待用，培養(yǎng)基熔化后倒入平皿冷卻凝固制成平板用，接種環(huán)在火焰旁取少許菌懸液，迅速送入平板內(nèi)，在平板培養(yǎng)基的一邊，作第1次平行劃線 2～3條，轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿約70°角，接種環(huán)灼燒滅菌后，通過第1次劃線部分作第2次平行劃線，然后再用同樣方法，作第3次平行劃線。微生物細(xì)胞數(shù)量將隨著劃線次數(shù)的增加而減少并逐步分散開來，如果劃線適宜的話，微生物能一一分散，經(jīng)培養(yǎng)后，可在平板表面得到單菌落。劃線的方法包括分區(qū)劃線法和連續(xù)劃線法兩種。

3、單細(xì)胞挑取法

單細(xì)胞挑取法是從待分離材料中只挑取一個(gè)細(xì)胞來培養(yǎng)。可用一臺(tái)顯微挑取器，裝于顯微鏡上，把一滴細(xì)菌懸浮液置于載玻片上，用裝于顯微挑取器上的極細(xì)的毛細(xì)吸管，在顯微鏡下對準(zhǔn)一個(gè)單獨(dú)的細(xì)菌細(xì)胞挑取，再接種于平板上培養(yǎng)而得到純培養(yǎng)。此法常用于真菌單孢子的分離，對操作技術(shù)要求較高。

4、選擇培養(yǎng)基法

不同種類的微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的要求不同，對不同的環(huán)境條件如溫度、pH、氧氣等要求也有很大的不同，并且對不同的物質(zhì)如消毒劑、抗生素、染料等也具有不同程度的抵抗能力。因此，利用這些特性，便可配制各種選擇性培養(yǎng)，從而抑制不需要的微生物的生長而把某種微生物分離純化出來。如含有1:50000～1:20000結(jié)晶紫的培養(yǎng)基能抑制大多數(shù)革蘭氏陽性菌的生長，在培養(yǎng)基中加入鏈霉素可抑制許多原核微生物的生長。

在分離某些植物或動(dòng)物病原菌時(shí)，可先將其接種至敏感宿主體內(nèi)，侵染后，宿主的某些組織中可能只含該種微生物，這樣容易得到純培養(yǎng)。也可以通過對樣品進(jìn)行處理，以消除不需要的微生物。如從樣品中分離芽孢細(xì)菌，可將樣品用適當(dāng)高溫處理一段時(shí)間，以殺死所有的非芽孢細(xì)菌，芽孢存活下來，繼續(xù)培養(yǎng)便可獲得芽孢菌的純培養(yǎng)。對一些在樣品中數(shù)量較少的微生物的分離，可先進(jìn)行富集培養(yǎng)，以幫助所需要的微生物的生長，從而容易得到所需要的純培養(yǎng)。