熒光偏振儀的技術(shù)支持
熒光偏振(FP)檢測(cè)技術(shù)是一種以熒光標(biāo)記的檢測(cè)技術(shù),它把熒光物質(zhì)標(biāo)記在特定物質(zhì)上,使原本微弱的反應(yīng)信號(hào)轉(zhuǎn)化成較強(qiáng)的熒光信號(hào),起到信號(hào)增強(qiáng)的作用。與此同時(shí)，在檢測(cè)系統(tǒng)中加上起偏器和檢偏器，當(dāng)從光源發(fā)出的一束光線經(jīng)垂直起偏器后成為垂直偏振光, 樣品被垂直偏振光激發(fā)而產(chǎn)生偏振熒光, 此熒光經(jīng)檢偏器后可測(cè)出與樣品濃度有關(guān)的水平或垂直方向的熒光偏振光強(qiáng)度。通過(guò)熒光強(qiáng)度和樣品濃度制作工作曲線，就可以定量分析了，極大提高了方法的靈敏度和特異性。
熒光偏振(FP)檢測(cè)技術(shù)不需要分離游離和結(jié)合的示蹤物，減少了研究人員的工作量，所有檢測(cè)都可以在溶液中進(jìn)行，具有快速、靈敏度高、特異性好、操作省時(shí)簡(jiǎn)便的優(yōu)點(diǎn)。
熒光偏振(FP)檢測(cè)技術(shù)的應(yīng)用：首先我們談?wù)勗诘鞍准っ富钚匝芯糠矫娴膽?yīng)用。Panvera 開(kāi)發(fā)了一種基于熒光偏振的蛋白激酶活性試劑盒，可方便快捷地進(jìn)行蛋白激酶抑制因子和激活因子的篩選工作。
其檢測(cè)原理如下：將磷酸化底物進(jìn)行熒光標(biāo)記，蛋白激酶產(chǎn)生的磷酸化產(chǎn)物不進(jìn)行熒光標(biāo)記。讓兩種磷酸化產(chǎn)物與抗絲氨酸抗體（絲氨酸和蘇氨酸是最常見(jiàn)的磷酸化位點(diǎn),因?yàn)槠浣Y(jié)構(gòu)末端含有羥基,羥基很活潑,可以與磷酸基團(tuán)結(jié)合）相競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合。當(dāng)反應(yīng)液中沒(méi)有蛋白激酶產(chǎn)生的磷酸化產(chǎn)物時(shí)，熒光標(biāo)記的磷酸化物與抗體相結(jié)合形成復(fù)合體，由于復(fù)合體較大，運(yùn)動(dòng)速率相對(duì)較小，受偏振光激發(fā)后產(chǎn)生的激發(fā)光具有較大的偏振值；當(dāng)反應(yīng)液中含有蛋白激酶產(chǎn)生的磷酸化產(chǎn)物時(shí)，因二者競(jìng)爭(zhēng)抗體的結(jié)合位點(diǎn)，結(jié)合到抗體上的熒光標(biāo)記物較少，游離的熒光標(biāo)記物在反應(yīng)液中很多，發(fā)出的激發(fā)光偏振值減小。當(dāng)?shù)鞍准っ傅幕钚栽綇?qiáng)，產(chǎn)生的磷酸化產(chǎn)物也就越多，與熒光標(biāo)記物的競(jìng)爭(zhēng)越激烈，對(duì)標(biāo)記物產(chǎn)生的激發(fā)光的性質(zhì)影響越大，因此偏振的改變直接與蛋白激酶的活性相關(guān)。利用這一原理可以檢測(cè)蛋白激酶活性。
當(dāng)然，熒光偏振技術(shù)的運(yùn)用遠(yuǎn)不僅于此，可以用來(lái)進(jìn)行對(duì)單核苷酸多態(tài)性的篩選、參與實(shí)時(shí)熒光定量 PCR-FP 技術(shù)、進(jìn)行核酸結(jié)構(gòu)變化研究、進(jìn)行體外細(xì)胞損傷檢測(cè)等。還可以與免疫技術(shù)結(jié)合，成為熒光偏振免疫技術(shù)，用來(lái)檢測(cè)金屬離子、微量藥物濃度、毒物檢測(cè)等。
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