熒光偏振技術(shù)的臨床應(yīng)用及優(yōu)勢(shì)
熒光偏振免疫技術(shù)(Fluorescence Polarizatior Immunassay)-這是一項(xiàng)相對(duì)較為成熟的技術(shù)。它利用熒光偏振原理,采用競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合法機(jī)制,常用來(lái)監(jiān)測(cè)小分子物質(zhì)如藥物、激素在樣本中的含量。
以藥物檢測(cè)為例,以熒光素標(biāo)記的藥物和含待測(cè)藥物的樣本為抗原,與一定量的抗體進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合。熒光標(biāo)記的藥物在環(huán)境中旋轉(zhuǎn)時(shí),偏振熒光的強(qiáng)度與其受激發(fā)時(shí)分子轉(zhuǎn)動(dòng)的速度成反比。大分子物質(zhì)旋轉(zhuǎn)慢,發(fā)出的偏振熒光強(qiáng);小分子物質(zhì)旋轉(zhuǎn)快,其偏振熒光弱(去偏振現(xiàn)象)。因此,在竟?fàn)幮越Y(jié)合過(guò)程中,樣本中待測(cè)藥物越多,與抗體結(jié)合的標(biāo)志抗原就越少,抗原抗體復(fù)合物體積越大,旋轉(zhuǎn)速率越慢,從而激發(fā)的熒光偏振光度也就越少。當(dāng)我們知道了已知濃度的標(biāo)記抗原與熒光偏振光性的關(guān)系后就可以測(cè)量未知濃度的物質(zhì)。因此,這項(xiàng)技術(shù)可用來(lái)檢測(cè)環(huán)境或食品樣品中有毒物質(zhì)如農(nóng)藥的殘留量。
此外,臨床醫(yī)學(xué)診斷也在廣泛采用熒光偏振。除應(yīng)用上述方法可測(cè)定人體體液樣本中某一特定物質(zhì)的含量外,也可直接應(yīng)用于臨床診斷。例如,由Cercek等開(kāi)發(fā)的惡性胖瘤診斷方法中提出,進(jìn)入淋巴細(xì)胞的熒光物質(zhì),受胞漿濃度有序性的干擾,其運(yùn)動(dòng)方向和速率會(huì)發(fā)生變化。胞漿粘度高時(shí),熒光物質(zhì)運(yùn)動(dòng)變慢,受偏振光激發(fā)產(chǎn)生的激發(fā)光與胞漿粘度低時(shí)產(chǎn)生的激發(fā)光性質(zhì)不同。通過(guò)追蹤測(cè)定激發(fā)的編振光性質(zhì),即可了解淋巴紐胞的胞漿流動(dòng)性、粘度等環(huán)境的變化,結(jié)合其它輔助診斷方法,可有助于癌癥的早斯診斷。利用熒光偏振,還可檢測(cè)病人樣本中病毒DNA 如HBv、HPv的復(fù)制量,為臨床診斷提供有力的量化指標(biāo)依據(jù)。
熒光偏振技術(shù)的優(yōu)勢(shì)熒光偏振技術(shù)比研究蛋白質(zhì)與核酸結(jié)合的傳統(tǒng)方法具有更多優(yōu)勢(shì)(特別是不生成有害的放射性廢物)并且檢測(cè)限更低,可達(dá)亞納摩爾級(jí)范圍。此外熒光偏振是真正均相的,允許實(shí)時(shí)檢測(cè)(動(dòng)力學(xué)檢測(cè)),對(duì)于濃度變化不敏感,是均相檢測(cè)形式(中間不含洗滌步驟)的最佳解決方案。
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