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布魯氏菌的血培養(yǎng)

一、布魯氏菌的生物學(xué)性狀

  布魯氏菌為胞內(nèi)寄生菌，專性需氧，營(yíng)養(yǎng)要求高，多數(shù)菌株培養(yǎng)時(shí)需要多種氨基酸、硫胺素、煙酸和生物素等，可在普通培養(yǎng)基中加入血清或肝滲液進(jìn)行培養(yǎng)。初次分離需5%-10%的CO₂，生長(zhǎng)緩慢，培養(yǎng)2-3天出現(xiàn)菌落，4-5天后菌落直徑可達(dá)2-3mm，菌落無色、半透明、表面光滑、無溶血，革蘭染色為革蘭陰性球桿菌，革蘭染色時(shí)堿性復(fù)紅著色弱，可延長(zhǎng)染色時(shí)間至3分鐘，鏡下菌體較小，呈細(xì)沙狀，偶見集聚成小團(tuán)。觸酶陽性，氧化酶陽性，脲酶快速陽性。

  有文獻(xiàn)報(bào)道使用全自動(dòng)血培養(yǎng)系統(tǒng)陽性率40-70%，平均培養(yǎng)時(shí)間5.7d(3-12d)，并且生長(zhǎng)曲線平緩。布魯菌在自然環(huán)境中抵抗力很強(qiáng)，在干燥土壤中可生存數(shù)月，在皮毛中、乳及乳制品、凍肉中時(shí)間生存較長(zhǎng)，對(duì)常用的物理消毒方法和化學(xué)消毒劑敏感，加熱60℃或陽光下暴曬10-20 min可殺死該菌，5%的石灰水、2%的來蘇兒、0.2%的漂白粉均可以在數(shù)分鐘內(nèi)將該菌殺死。

二、如何抓住容易漏檢的布魯氏菌

  由于布魯氏菌生長(zhǎng)比較緩慢，菌落細(xì)小，血培養(yǎng)的生長(zhǎng)曲線比較平緩，血培養(yǎng)儀器報(bào)陽時(shí)間較長(zhǎng)，通常會(huì)超過常規(guī)五天報(bào)告陰性的時(shí)間，很容易在第五天就報(bào)告陰性而不再繼續(xù)觀察。

  所以我們可以適當(dāng)增加觀察時(shí)間，特別是臨床醫(yī)生如果得知患者發(fā)病前與家畜或畜產(chǎn)品、布魯氏菌培養(yǎng)物等有密切接觸史，或生活在布魯菌病流行區(qū)，并有發(fā)熱，乏力，多汗，肌肉和關(guān)節(jié)疼痛，或伴有肝、脾、淋巴結(jié)和睪丸腫大等表現(xiàn)，高度懷疑是布魯菌病患者時(shí)，應(yīng)告知微生物室檢驗(yàn)人員其流行病學(xué)史及臨床癥狀。

  檢驗(yàn)人員則可延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間至7天及以上，密切關(guān)注其生長(zhǎng)情況，并進(jìn)行血培養(yǎng)的盲傳，傳至平皿后也需延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間至48小時(shí)（2天）以上并注意其生長(zhǎng)情況，細(xì)菌革蘭染色時(shí)可延長(zhǎng)堿性復(fù)紅染色，或者進(jìn)行瑞氏染色，便于觀察和判斷。

  另外，雖然血培養(yǎng)是診斷包括布魯菌病在內(nèi)的細(xì)菌感染的金標(biāo)準(zhǔn)，但布魯桿菌培養(yǎng)陽性率僅40%~70%。骨髓培養(yǎng)有更高的敏感性，更短的培養(yǎng)時(shí)間，尤其對(duì)于評(píng)估既往用過抗菌藥物的患者應(yīng)優(yōu)先考慮采取骨髓培養(yǎng)。布魯氏菌也可從膿液、組織、腦脊液、胸水、關(guān)節(jié)液和腹水中培養(yǎng)。

  而布魯菌病血清凝集試驗(yàn)是布魯菌病診斷最常用的簡(jiǎn)單快速檢測(cè)手段，但特異性較差，部分陽性結(jié)果甚至不能區(qū)分是既往感染還是現(xiàn)患感染，僅可作為輔助診斷。

總結(jié)三個(gè)抓住布魯氏菌的策略：

1. 多與臨床醫(yī)生溝通，仔細(xì)詢問患者臨床癥狀及接觸史。

2. 延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間和染色時(shí)間，仔細(xì)觀察細(xì)菌菌落形態(tài)及染色。

3. 必要時(shí)增加骨髓培養(yǎng)。

三、檢驗(yàn)人員要注意生物安全防護(hù)

  布魯氏菌污染環(huán)境后形成氣溶膠，可發(fā)生呼吸道感染，特別是臨床微生物室更是布魯氏菌感染的高危區(qū)，若在菌株鑒定處理過程中未嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行生物安全防護(hù)，易導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)室人員感染。布魯氏菌在《人間傳染的病原微生物名錄》中屬于第二類危險(xiǎn)程度的細(xì)菌，少量樣本操作必須在BSL-2級(jí)實(shí)驗(yàn)室的生物安全柜中進(jìn)行，而大量活菌操作須在BSL-3級(jí)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)室防護(hù)和標(biāo)準(zhǔn)化操作，防止發(fā)生實(shí)驗(yàn)室內(nèi)感染。

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