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其檢測(cè)原理如下：

  將磷酸化底物進(jìn)行熒光標(biāo)記，蛋白激酶產(chǎn)生的磷酸化產(chǎn)物不進(jìn)行熒光標(biāo)記。讓兩種磷酸化產(chǎn)物與抗絲氨酸抗體（絲氨酸和蘇氨酸是最常見的磷酸化位點(diǎn),因?yàn)槠浣Y(jié)構(gòu)末端含有羥基,羥基很活潑,可以與磷酸基結(jié)合）相競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合。當(dāng)反應(yīng)液中沒有蛋白激酶產(chǎn)生的磷酸化產(chǎn)物時(shí)，熒光標(biāo)記的磷酸化與抗體相結(jié)合形成復(fù)合體，由于復(fù)合體較大，運(yùn)動(dòng)速率相對(duì)較小，受偏振光激發(fā)后產(chǎn)生的激發(fā)光具有較大的偏振值；當(dāng)反應(yīng)液中含有蛋白激酶產(chǎn)生的磷酸化產(chǎn)物時(shí)，因二者競(jìng)爭(zhēng)抗體的結(jié)合位點(diǎn)，結(jié)合到抗體上的熒光標(biāo)記物較少，游離的熒光標(biāo)記物在反應(yīng)液中很多，發(fā)出的激發(fā)光偏振值減小。當(dāng)?shù)鞍准っ傅幕钚栽綇?qiáng)，產(chǎn)生的磷酸化產(chǎn)物也就越多，與熒光標(biāo)記物的競(jìng)爭(zhēng)越激烈，對(duì)標(biāo)記物產(chǎn)生的激發(fā)光的性質(zhì)影響越大，因此偏振的改變直接與蛋白激酶的活性相關(guān)。利用這一原理可以檢測(cè)蛋白激酶活性。

  當(dāng)然，熒光偏振技術(shù)的運(yùn)用遠(yuǎn)不僅于此，可以用來進(jìn)行對(duì)單核苷酸多態(tài)性的篩選、參與實(shí)時(shí)熒光定量 PCR-FP 技術(shù)、進(jìn)行核酸結(jié)構(gòu)變化研究、進(jìn)行體外細(xì)胞損傷檢測(cè)等。還可以與免疫技術(shù)結(jié)合，成為熒光偏振免疫技術(shù)，用來檢測(cè)金屬離子、微量藥物濃度、毒物檢測(cè)等。