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現(xiàn)行GB4789.9-2014《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 空腸彎曲菌檢驗(yàn)》（以下簡(jiǎn)稱GB4789.9法）中使用Bolton肉湯增菌，改良CCD和Skirrow血瓊脂分離培養(yǎng)，如樣品雜菌嚴(yán)重較難分離到彎曲菌，我國(guó)很多地區(qū)禽肉樣品中空腸彎曲菌的檢出率低于10%，嚴(yán)重低估了我國(guó)空腸彎曲菌食品污染的疾病負(fù)擔(dān)。2019年中華預(yù)防醫(yī)學(xué)會(huì)發(fā)布了T/CPMA 006-2019《空腸彎曲菌、結(jié)腸彎曲菌檢驗(yàn)方法》團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)（以下簡(jiǎn)稱T/CPMA 006法），主要以增菌后過濾培養(yǎng)為基礎(chǔ)，提高了食品樣本中空腸彎曲菌的檢出率，部分實(shí)驗(yàn)室采用T/CPMA 006標(biāo)準(zhǔn)方法對(duì)禽肉類空腸彎曲菌的分離率可達(dá)27%～75%。

據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，深圳市南山區(qū)疾病預(yù)防控制中心采集2020年11-12月深圳市某市場(chǎng)39份貝類海鮮樣品，采購(gòu)青島中創(chuàng)匯科生物科技有限公司改良CCD瓊脂，Skirrow血瓊脂，雙孔濾膜法雙孔板等進(jìn)行GB4789.9法與T/CPMA006法檢測(cè)空腸彎曲菌效果的比較實(shí)驗(yàn)。

1、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：

采用GB4789.9和T/CPMA 006的2種標(biāo)準(zhǔn)方法對(duì)貝類海鮮進(jìn)行空腸彎曲菌的分離，并通過模擬樣品獲得海鮮樣品中彎曲菌的最低檢出濃度和檢出率，同時(shí)應(yīng)用MALDI-TOF和熒光PCR作為空腸彎曲菌的驗(yàn)證和輔助檢測(cè)。

2、樣品來源：

采集2020年11-12月深圳市某市場(chǎng)39份貝類海鮮樣品、空腸彎曲菌標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC33560；

3、儀器與試劑：

改良CCD瓊脂（青島中創(chuàng)匯科生物），Skirrow血瓊脂（青島中創(chuàng)匯科生物），雙孔濾膜法雙孔板（青島中創(chuàng)匯科生物），質(zhì)譜儀（MALDI-TOF，法國(guó)生物梅里埃），熒光PCR儀（美國(guó)Bio-Rad型號(hào)CFX96），智能厭氧系統(tǒng)，PCR Master，引物和探針等；

4、實(shí)驗(yàn)方案：

（1）原始樣品的陽(yáng)性檢出率：分別用GB4789.9和T/CPMA 006的2種標(biāo)準(zhǔn)方法對(duì)采集到的深圳市某市場(chǎng)39份貝類海鮮樣品，進(jìn)行空腸彎曲菌檢測(cè)；

（2）模擬樣本的最低檢出濃度：在檢測(cè)陰性的標(biāo)本中摻入終濃度分別為10⁰、10¹、10²、10³、10⁴、10⁵CFU/g的活菌進(jìn)行模擬實(shí)驗(yàn)，每個(gè)濃度模擬3個(gè)樣品，分析比較2種標(biāo)準(zhǔn)方法的最低檢出濃度；

（3）最低檢出濃度下的檢出率：摻入終濃度分別為10³和10⁴CFU/g的空腸彎曲菌活菌，每個(gè)濃度各10份樣品，比較2種標(biāo)準(zhǔn)方法的檢出率差異；

（4）輔助檢測(cè)：利用MALDI-TOF質(zhì)譜和熒光PCR作為菌落驗(yàn)證和輔助檢測(cè)；

5、實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

6、實(shí)驗(yàn)結(jié)論：

（1）海鮮中也存在空腸彎曲菌的污染。

（2）與GB4789.9法相比，T/CPMA 006法可顯著提高海鮮樣品中空腸彎曲菌的檢出率，并將最低檢出濃度降低2個(gè)數(shù)量級(jí)。

本實(shí)驗(yàn)中T/CPMA 006的檢測(cè)結(jié)果優(yōu)于GB4789.9的原因是T/CPMA 006采用低速離心，可最大限度將樣品中的彎曲菌富集，且采用廣譜增菌液進(jìn)行增菌，由于增菌液中加入促生長(zhǎng)因子和血液成分，彎曲菌可以得到充分的增菌，最后獲得較純的彎曲菌，便于挑取。而SKIRROW血瓊脂和改良CCD瓊脂中生長(zhǎng)出來的雜菌多，可疑菌落很少，容易漏檢。

【參考文獻(xiàn)】：劉楚云，馬艷萍，段永翔等.海鮮產(chǎn)品中空腸彎曲菌2種檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)的比較［J］.職業(yè)與健康，2023年9月第39卷第18期.