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青島熒光偏振儀的檢測原理

其檢測原理如下：將磷酸化底物進行熒光標(biāo)記，蛋白激酶產(chǎn)生的磷酸化產(chǎn)物不進行熒光標(biāo)記。讓兩種磷酸化產(chǎn)物與抗絲氨酸抗體（絲氨酸和蘇氨酸是常見的磷酸化位點,因為其結(jié)構(gòu)末端含有羥基,羥基很活潑,可以與磷酸基團結(jié)合）相競爭結(jié)合。當(dāng)反應(yīng)液中沒有蛋白激酶產(chǎn)生的磷酸化產(chǎn)物時，熒光標(biāo)記的磷酸化物與抗體相結(jié)合形成復(fù)合體，由于復(fù)合體較大，運動速率相對較小，受偏振光激發(fā)后產(chǎn)生的激發(fā)光具有較大的偏振值；當(dāng)反應(yīng)液中含有蛋白激酶產(chǎn)生的磷酸化產(chǎn)物時，因二者競爭抗體的結(jié)合位點，結(jié)合到抗體上的熒光標(biāo)記物較少，游離的熒光標(biāo)記物在反應(yīng)液中很多，發(fā)出的激發(fā)光偏振值減小。當(dāng)?shù)鞍准っ傅幕钚栽綇?，產(chǎn)生的磷酸化產(chǎn)物也就越多，與熒光標(biāo)記物的競爭越激烈，對標(biāo)記物產(chǎn)生的激發(fā)光的性質(zhì)影響越大，因此偏振的改變直接與蛋白激酶的活性相關(guān)。利用這一原理可以檢測蛋白激酶活性。

當(dāng)然，熒光偏振技術(shù)的運用遠不僅于此，可以用來進行對單核苷酸多態(tài)性的篩選、參與實時熒光定量 PCR-FP 技術(shù)、進行核酸結(jié)構(gòu)變化研究、進行體外細(xì)胞損傷檢測等。還可以與免疫技術(shù)結(jié)合，成為熒光偏振免疫技術(shù)，用來檢測金屬離子、微量藥物濃度、毒物檢測等。

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