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標(biāo)準(zhǔn)菌株的復(fù)蘇、復(fù)壯和保存

瀏覽: 18 次 發(fā)布時間:2024-03-06

標(biāo)準(zhǔn)菌株的復(fù)蘇、復(fù)壯或培養(yǎng)物的制備應(yīng)按供應(yīng)商提供的說明或按已驗證的方法進行。復(fù)蘇、復(fù)壯應(yīng)選擇營養(yǎng)成分豐富且全面的培養(yǎng)基,一般不使用選擇性較強的培養(yǎng)基;特殊的一些菌株在普通的培養(yǎng)基上生長不好,可能還需添加生長因子。

標(biāo)準(zhǔn)儲備菌株應(yīng)進行純度和特性確認。純度確認包括:平板劃線查看菌落形態(tài)、革蘭氏染色、顯微鏡觀察菌體形態(tài)等;關(guān)鍵特性確認可選擇:特征生化反應(yīng)確認、試劑盒鑒定、菌種鑒定儀鑒定等。需要注意的是,從開啟、復(fù)蘇、復(fù)壯到純度和特性的確認,都應(yīng)做好實驗記錄。

標(biāo)準(zhǔn)儲備菌株保存時,可將培養(yǎng)物等份懸浮于抗冷凍的培養(yǎng)基中,并分裝于小瓶中,藥典建議采用低溫冷凍干燥、液氮貯存、超低溫冷凍(低于-30℃)等方法保存。低于-70℃或低溫冷凍干燥方法可以延長菌種保存時間。菌種應(yīng)設(shè)專人管理,菌種保藏的地點應(yīng)采取一定的措施使非管理者不能輕易獲取,例如加鎖保管,雙人保管等。

標(biāo)準(zhǔn)儲備菌株可用于制備每月或每周1次轉(zhuǎn)種的工作菌株。冷凍菌種一旦解凍轉(zhuǎn)種制備工作菌株后,不得重新冷凍和再次使用。

從保藏機構(gòu)獲取的凍干菌種為0代菌種,每轉(zhuǎn)接一次增加一代(1代是指將活的培養(yǎng)物接種到微生物生長的新鮮培養(yǎng)基中培養(yǎng),任何形式的轉(zhuǎn)種均被認為傳代一次),工作菌株的傳代次數(shù)應(yīng)嚴格控制,不得超過5代,以防止過度的傳代增加菌株變異的風(fēng)險。


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