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影響革蘭氏染色結(jié)果準(zhǔn)確性的關(guān)鍵因素

瀏覽: 18 次 發(fā)布時(shí)間:2024-05-21

1.試劑影響

這是我們首先應(yīng)該確保的,我們使用的試劑必須是有效的。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)當(dāng)建立有效的試劑管理程序,從試劑的驗(yàn)收到存放、使用、過期后的廢棄處理都應(yīng)有嚴(yán)格規(guī)定,確保我們使用的試劑是有效的。工欲善其事必先利其器,這也是我們?cè)囼?yàn)成功最基礎(chǔ)的一環(huán)。


2.染色菌的選擇 

菌齡對(duì)革蘭氏染色結(jié)果的影響是十分大的。

我們?nèi)旧^程中選擇的菌應(yīng)該是處于活躍生長(zhǎng)期,這樣的細(xì)菌活性強(qiáng),生理特征明顯,所以染色的結(jié)果準(zhǔn)確度高,一般情況下不會(huì)出現(xiàn)誤差。培養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng)的革蘭氏陽性菌,由于細(xì)胞老化,甚至有部分菌在染色之前就已經(jīng)死亡或者自行溶解了,造成細(xì)胞壁通透性增加,就會(huì)呈現(xiàn)出假陰性。


3.涂菌的狀態(tài)

在染色最初的涂布中,在挑取菌體后應(yīng)該在無菌水上涂成薄薄的菌膜。而在涂布過程中,若是菌體堆積,也會(huì)極大影響染色結(jié)果的準(zhǔn)確性。菌落堆積過多,往往菌體之間變得毫無縫隙,而其細(xì)胞壁的成分影響造成了脫色的情況不佳,容易產(chǎn)生假陽性的結(jié)果。

同時(shí),在初染、媒染及復(fù)染的過程中,應(yīng)將染液覆蓋整個(gè)菌膜,避免一部分菌染色而另一部分菌沒有染色。因此在涂片過程一定要將菌膜涂得少而均勻,這樣才能達(dá)到最佳效果。


4.媒染時(shí)間

媒染時(shí)間對(duì)革蘭氏陰性菌的染色結(jié)果有很大影響。

由于媒染時(shí)間過長(zhǎng),結(jié)晶紫在碘液長(zhǎng)時(shí)間作用下過分牢固結(jié)合在菌體細(xì)胞壁上,影響了酒精的脫色效果,從而會(huì)導(dǎo)致這種假陽性的效果。


5.酒精脫色

酒精脫色也是一個(gè)對(duì)結(jié)果影響較大的操作過程。

革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌最主要的差異是細(xì)胞壁肽聚糖層厚度和結(jié)構(gòu),革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁肽聚糖層很薄,脂多糖含量高因此在酒精脫色時(shí),細(xì)菌細(xì)胞壁的多糖成分會(huì)被酒精溶解,增大了細(xì)胞壁的通透性,結(jié)晶紫及碘復(fù)合物就很快被酒精洗脫,之后就會(huì)被沙黃復(fù)染呈紅色;而陽性菌肽聚糖層厚,脂多糖少,酒精只能起到脫水效果而無法進(jìn)入,這樣結(jié)晶紫和復(fù)合物就無法洗脫出來使細(xì)胞呈紫色。

因此,酒精脫色時(shí)間短,脫色效果不佳,會(huì)導(dǎo)致陰性菌菌體內(nèi)的結(jié)晶紫和復(fù)合物不能有效的全部洗脫出來,就會(huì)出現(xiàn)明顯的誤差,使陰性菌出現(xiàn)假陽性。洗脫時(shí)間過長(zhǎng),也會(huì)導(dǎo)致陽性菌的細(xì)胞壁被酒精破壞,導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)的紫色被洗脫,呈現(xiàn)假陰性。因此洗脫時(shí)間也是革蘭氏染色的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。洗脫時(shí)間應(yīng)當(dāng)嚴(yán)格控制在20s-30s之間,同時(shí)保證洗脫效果。




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