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革蘭氏染色法(Gramstain)不僅能觀察到細(xì)菌的形態(tài)而且還可將所有細(xì)菌區(qū)分為兩大類(lèi):染色反應(yīng)呈藍(lán)紫色的稱(chēng)為革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌，用G十表示:染色反應(yīng)呈紅色(復(fù)染顏色)的稱(chēng)為革蘭氏陰性細(xì)菌，用G一表示。細(xì)菌對(duì)于革蘭氏染色的不同反應(yīng)，是由于它們細(xì)胞壁的成分和結(jié)構(gòu)不同而造成的。革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌的細(xì)胞壁主要是由肽聚糖形成的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)組成的，在染色過(guò)程中，當(dāng)用乙醇處理時(shí)，由于脫水而引起網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)中的孔徑變小，通透性降低，使結(jié)晶紫一碘復(fù)合物被保留在細(xì)胞內(nèi)而不易脫色，因此，呈現(xiàn)藍(lán)紫色:革蘭氏陰性細(xì)菌的細(xì)胞壁中肽聚糖含量低，而脂類(lèi)物質(zhì)含量高，當(dāng)用乙醇處理時(shí)，脂類(lèi)物質(zhì)溶解，細(xì)胞壁的通透性增加，使結(jié)晶紫一碘復(fù)合物易被乙醇抽出而脫色，然后又被染上了復(fù)染液(番紅)的顏色，因此呈現(xiàn)紅色。

革蘭氏染色的關(guān)鍵在于嚴(yán)格掌握酒精脫色程度，如脫色過(guò)度，則陽(yáng)性菌可被誤染為陰性菌。而脫色不夠時(shí)，陰性菌可被誤染為陽(yáng)性菌。此外，菌齡也影響染色結(jié)果，如陽(yáng)性菌培養(yǎng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，或已死亡及部分菌自行溶解了，都常呈陰性反應(yīng)。