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革蘭氏染色法是細(xì)菌學(xué)中廣泛使用的一種鑒別染色法，這種染色法是由一位丹麥醫(yī)生漢斯·克里斯蒂安·革蘭(Hans Christian Gram，1853年-1938年)于1884年所發(fā)明，最初是用來鑒別肺炎球菌與克雷白氏肺炎菌之間的關(guān)系。

革蘭氏陽性菌：葡萄球菌屬(主要是金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌等)、鏈球菌屬(肺炎鏈球菌、草綠色鏈球菌、腸球菌等)、白喉?xiàng)U菌、炭疽桿菌、破傷風(fēng)桿菌、蠟樣芽孢桿菌等，其中，金黃色葡萄球菌、腸球菌等為臨床重要的病原菌

革蘭氏陰性菌：埃希氏菌屬、枸櫞酸菌屬、假單胞菌屬(綠膿桿菌等)、莫拉菌屬(卡他莫拉菌等)、奈瑟菌屬(淋球菌、腦膜炎雙球菌等)、不動(dòng)桿菌屬(鮑曼不動(dòng)桿菌、羅菲不動(dòng)桿菌等)、克雷伯菌屬(主要是肺炎克雷伯桿菌)、沙門氏菌屬、志賀氏菌屬(痢疾桿菌等)、黃桿菌屬、變形桿菌屬、軍團(tuán)菌屬、耶爾森菌屬、嗜血桿菌屬(杜克雷嗜血桿菌、流感嗜血桿菌等)、產(chǎn)氣桿菌屬、霍亂弧菌、陰溝腸桿菌等。革蘭氏陰性菌在院內(nèi)感染中的細(xì)菌感染中占了大約65%，且大多菌株容易對(duì)抗菌藥物耐藥，產(chǎn)生"新德里金屬酶"(NDM-1)的絕大多數(shù)細(xì)菌都是革蘭氏陰性菌(主要是大腸桿菌、鮑曼不動(dòng)桿菌和肺炎克雷伯桿菌)。

未經(jīng)染色之細(xì)菌與周圍環(huán)境折光率差別甚小，故在顯微鏡下極難觀察。染色后細(xì)菌與環(huán)境形成鮮明對(duì)比，革蘭氏陽性菌呈藍(lán)紫色，革蘭氏陰性菌呈紅色，可以清楚地觀察到細(xì)菌的形態(tài)、排列及某些結(jié)構(gòu)特征，而用以分類鑒定。根據(jù)細(xì)菌的革蘭氏染色性質(zhì)，可以縮小鑒定范圍，有利于進(jìn)一步分離鑒定，以對(duì)疾病做出診斷。又由于各種抗生素的抗菌譜不同，革蘭氏染色尚可做為選用抗生素的參考。

染色步驟：

1、 取載玻片用紗布擦干，載玻片的一面用marker筆畫一個(gè)小圈(用來大致確定菌液滴的位置)。涂菌的部位在火焰上烤一下，除去油脂。

2、 涂片：

液體培養(yǎng)基：左手持菌液試管，在酒精燈火焰附近5cm左右打開管蓋;右手持接種環(huán)在火焰中燒灼滅菌，等冷卻后從試管中沾取菌液一環(huán)，在潔凈無脂的載玻片上涂直徑2mm左右的涂膜，最后將接種環(huán)在火焰上燒灼滅菌。

固體培養(yǎng)基：先在載玻片上滴一滴無菌水，再用接種環(huán)取少量菌體，涂在載玻片上，使其薄而均勻。

3、 晾干：讓涂片在空氣中自然干燥。

4、 固定：讓菌膜朝上，通過火焰2-3次固定(以不燙手為宜)。

5、 染色：將固定過的涂片放報(bào)紙上，滴加草酸銨結(jié)晶紫液，染1min。

6、 水洗：用水緩慢沖洗涂片上的染色液，用吸水紙吸干。簡單染色結(jié)束可觀察細(xì)胞形態(tài)。

7、 媒染：滴加1滴碘液，染1min，水洗。

8、 脫色：吸去殘留水，連續(xù)滴加95%乙醇脫色20-30s至流出液無紫色，立即水洗。

9、 復(fù)染：滴加蕃紅復(fù)染3-5min，水洗。至此，革蘭氏染色結(jié)束。